人类转移性黑色素瘤A2058培养条件

为了确保尊龙凯时人生就博提供的细胞培养效果，以下为人类转移性黑色素瘤A2058的标准培养条件：

• 气相：95%空气 + 5%二氧化碳
• 温度：37℃
• 培养基：DMEM + 10% FBS + 1% P/S

传代方法

在细胞培养过程中，建议首次传代比例为1:2，并在细胞培养两天后更换培养液。

建议在购买细胞时一起购入相应配套产品，能够享受更为优惠的价格。收到细胞后，请勿立即打开瓶盖，及时检查培养瓶上的细胞名称是否与您所订购的一致，并确认瓶身是否出现破损或泄漏等情况。

如果没有异常情况，建议在显微镜下观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（建议采用40x, 100x, 200x下各拍一张），前三天的照片是售后重要依据，若不提供照片，默认细胞状态良好。

贴壁细胞传代步骤

以下是贴壁细胞的传代步骤：

1. 弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，直至细胞大部分变圆并脱落。
3. 轻轻敲打培养瓶，加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
4. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
5. 依照1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，并放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

悬浮细胞传代步骤

悬浮细胞的传代步骤如下：

1. 使用半量换液法处理：将培养瓶竖着静置1小时，轻吸走大约3ml培养基，然后补充3ml完全培养基；如培养基变色慢，可直接加入约500μl的FBS。
2. 如需分瓶，可将细胞悬液收集到离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬，按1:2比例分至新T25瓶中，添加6-8ml的新完全培养基以维持细胞生长活力。

细胞冻存和复苏

细胞冻存和复苏的流程如下：

细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察后加入5ml完全培养液终止消化，轻吹使细胞脱落。
3. 将悬液移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清，加入1ml无血清冻存液并混匀后封入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱储存，若需转入液氮罐，须在-80℃下存放至少24小时。

细胞复苏

1. 从液氮取出冻存管，立即置于37℃水浴中解冻，待无结冰后用75%酒精擦拭管外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，进行1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放置于37℃、5% CO2的培养箱中。
4. 次日更换为新鲜培养基继续培养。

注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因粘附不牢而脱落。这属于正常现象。如出现脱落较多的情况，建议收集培养液于离心管中进行处理。

尊龙凯时人生就博提供的细胞在运输途中可能遭遇各种问题，若出现细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等情况，均可申请重发。